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实验室简明评估颖泰三号抑菌效果报告

时间:2021-11-19 浏览:76次
详细说明

颖泰三号主要成分是枯草芽孢杆菌及产生的枯草菌肽抗菌肽,枯草菌肽由37个氨基酸组成,结构中含有两个α-螺旋、一个连接环和两个二硫键。其成分明确,结构清晰,可有效杀灭产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌等革兰氏阳性菌。

通过不同方法检测颖泰三号和其他同类芽孢杆菌产品的抑菌性能,评估不同产品对产气荚膜梭菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌的抑菌效果,为饲料厂在替代抗生素方面的应用提供参考依据。





试验一:比浊法(共培养)测定
颖泰三号的抑菌率

试验目的:

通过比浊法测定颖泰三号、国产地衣芽孢杆菌和进口枯草芽孢杆菌等3个产品发酵液不同浓度下对产气荚膜梭菌CVCC2027、金黄色葡萄球菌CMCC26003等2种细菌的抑菌率,评估不同产品的抑菌效果。


试验方法:参照药典方法,分别取0.1mL产气荚膜梭菌CVCC2027、金黄色葡萄球菌CMCC26003细菌菌液,加入含10mL LB液体培养基的灭菌试管中,再将制备好的3个待测样品溶液分别按照1%、3%、6%的浓度(0.1mL、0.3mL、0.6mL)加入前述试管中。同时设立空白对照(试管内只加LB液体培养基和细菌菌液)。

37℃培养,24小时后测定各试管菌液OD600nm(用LB培养基调零),记录、计算各产品不同浓度下的抑菌率。

抑菌率=(A-A)/A*100%

注:A:空白对照组24h OD值;

  A:样品组24h OD值。


试验结果如下:

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图1.1 颖泰三号和其他芽孢杆菌产品对2种细菌的抑菌率


试验图片(每个图片上的试管从左至右依次为:1%、3%、6%、对照)如下:

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1.2 颖泰三号对2种细菌的抑菌效果


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1.3 国产地衣芽孢杆菌对2种细菌的抑菌效果


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图1.4 进口枯草芽孢杆菌对2种细菌的抑菌效果

结论:

针对产气荚膜梭菌CVCC2027,国产地衣芽孢杆菌效果最弱,抑菌率低于90%,在6%最大浓度下,进口枯草芽孢杆菌抑菌率为91.2%,颖泰三号1%浓度下,抑菌率即达到99.6%,远高于其他2种产品;针对金黄色葡萄球菌 CMCC26003,颖泰三号效果最优,3%浓度下,抑菌率为97.9%,为国产地衣芽孢杆菌的1.96倍,进口枯草芽孢杆菌产品无抑菌效果。


试验二:打孔法测定颖泰三号对产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度
试验目的:通过打孔法测定颖泰三号、国产地衣芽孢杆菌和进口枯草芽孢杆菌等3个产品对5株产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度,评估不同产品的抑菌效果。

试验方法:将3个样品益生菌活化,于LB培养基中37℃培养16h,之后将各产品发酵液离心,取其上清液,用无菌水2倍梯度稀释依次制备成1/2、1/4、1/8、……、1/256的样品溶液,备用。

将各细菌菌液加入到TSC培养基中,之后倒入放有牛津杯的素琼脂培养皿中,取出牛津杯,吸取150μL不同浓度的各样品溶液加入到相应的孔内,同时设立灭菌水为空白对照,并在培养皿上做好标记。

将加过样的培养皿移入37℃培养箱中培养16h,测量、记录抑菌圈。


试验结果如下:
表2.1 颖泰三号和其他芽孢杆菌产品对5株产气荚膜梭菌的抑菌圈对比

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注:1.抑菌圈直径单位:mm,“—”表示没有抑菌圈;2. CVCC2027购自于中国兽医药品监察所,猪产气荚膜梭菌1和2,鸡产气荚膜梭菌1和2分别分离自不同的猪场和鸡场,下同。

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3种产品对不同产气荚膜梭菌的MIC:

表2.2 颖泰三号和其他芽孢杆菌产品对5种产气荚膜梭菌的MIC 

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本次试验各孔样品设置如下:

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试验图片(标注浓度样品孔处为各产品MIC位置圈)如下:

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2.1 不同产品对产气荚膜梭菌CVCC2027的抑菌圈

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2.2 不同产品对猪产气荚膜梭菌1的抑菌圈


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2.3 不同产品对猪产气荚膜梭菌2的抑菌圈


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2.4 不同产品对鸡产气荚膜梭菌1的抑菌圈


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2.5 不同产品对鸡产气荚膜梭菌2的抑菌圈

结论:

同等浓度下,颖泰三号对5种产气荚膜梭菌的抑菌圈直径最大,在1/64浓度时,抑菌圈直径最低为16.3mm,属极敏感抗菌物质;颖泰三号对产气荚膜梭菌CVCC2027的MIC值为≤1/256,对另外四株临床分离型菌株的MIC值均为1/128,其MIC值最低,抑菌效果最好。



注:以上数据均来自农业农村部饲用抗生素替代技术重点实验室。


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综上所述
通过不同的检测方法评估颖泰三号和其他同类芽孢杆菌产品的抑菌效果,在杀灭产气荚膜梭菌和金黄色葡萄球菌等对养殖业危害较大的环境常在菌上,颖泰三号抑菌率、抑菌圈和MIC均优于其他同类产品,在饲料禁抗,养殖减抗大背景下,颖泰三号可有效替代抗生素,减少疾病发生率,提高生产成绩。

撰稿:成鹏、李洪宇

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